Pet glavnih sistema tečnog hromatografa su sledeći:
1. Sistem ubrizgavanja
Generalno, za dovršetak operacije ubrizgavanja koristi se membranski uzorkivač ili prostorija za injektiranje pod visokim pritiskom, a volumen ubrizgavanja je konstantan.
Ovo je korisno za poboljšanje reproduktivnosti analitičkih uzoraka.
2. Sistem za infuziju
Sistem se sastoji od tri dela: pumpe visokog pritiska, rezervoara mobilne faze i gradientera. Opšti pritisak pumpe visokog pritiska je 1,47~4,4X107Pa, a brzina protoka je podesiva i stabilna. Kada mobilna faza visokog pritiska prođe kroz kolonu za hromatografiju, može smanjiti efekat difuzije uzorka u koloni i ubrzati njegovu brzinu kretanja u koloni. Ovo je korisno za poboljšanje rezolucije, vraćanje uzorka i održavanje biološke aktivnosti uzorka. Greške u skladištenju mobilne faze i gradijentori mogu promijeniti mobilnu fazu u skladu sa svojstvima stacionarne faze i uzorka, uključujući promjenu polariteta eluenta, jačine jona, pH vrijednosti ili prelazak na druge metode
3. Sistem razdvajanja
Sistem uključuje hromatografske kolone, spojne cijevi i termostate.
Dužina hromatografske kolone je općenito 10-50cm (ako su potrebne dvije u kombinaciji, između njih se može dodati spojna cijev), sa unutrašnjim promjerom od 2-5mm. Izrađen je od visokokvalitetnog nehrđajućeg čelika, staklene cijevi debelih stijenki, legure titana i drugih materijala. Kolona je opremljena sa prečnikom od 5-10 μ Fiksna faza sa veličinom čestica m (sastavljena od matrice i fiksne tečnosti), u kojoj se matrica sastoji od smole visoke mehaničke čvrstoće ili silika gela, od kojih oba imaju karakteristike inertnosti (kao što je osnovno uklanjanje silikatnih gena na površini silika gela), poroznosti i velike specifične površine, osim toga, njegova površina je mehanički obložena (slično pripremi stacionarnih faza u plinskoj hromatografiji) ili hemijski spojeni sa različitim genima (kao što su fosfat, kvaternarni amin, hidroksimetil, fenil, amino ili alkil grupe ugljikovih lanaca različite dužine) ili ligandima.
Stoga ove vrste tvari s različitim fiksnim relativnim strukturama imaju dobru selektivnost. Na primjer, spajanjem lektina graška (PSA) na površini poroznog silika gela, glikoprotein se može izolirati iz fibroblasta. Osim toga, plazmid stacionarne faze je mali, a sloj kolone je lako postići ujednačeno i gusto stanje, što može uvelike smanjiti efekt difuzije vrtložne struje. Matrica ima malu veličinu čestica i plitke mikropore, a uzorak ima kratak prijenos mase u mikroporoznom području. Oni su korisni za smanjenje propusnosti i poboljšanje rezolucije. Prema analizi teorije efikasnosti kolone, što je manja veličina čestica matrice, veći je teoretski broj N tacne.
4. Sistem detekcije
Postoje tri najčešće korišćena detektora za tečnu hromatografiju: UV detektor, detektor diferencijalnog indeksa refrakcije i detektor fluorescencije
UV detektor
Ovaj detektor je pogodan za detekciju uzoraka sa performansama apsorpcije za ultraljubičasto (ili vidljivo svjetlo) svjetlo.
Njegove karakteristike: širok spektar primjena (kao što su proteini, nukleinske kiseline, aminokiseline, nukleotidi, peptidi, hormoni, itd.); Visoka osjetljivost (granica detekcije od 10-10g/mL); Široki linearni raspon; Nije osjetljiv na promjene temperature i protoka; Može detektovati uzorke eluirane gradijentom rastvora.
5. Sistem obrade podataka
Ovaj sistem može prikupljati, skladištiti, prikazivati, štampati i obraditi podatke testa, omogućavajući pravilno odvajanje, pripremu ili identifikaciju uzoraka.
Ukratko, tečni hromatograf se sastoji od sistema uzorka, sistema za infuziju, sistema za odvajanje, sistema za detekciju i sistema za obradu podataka. Kombinacija ovih sistema čini eksperiment pouzdanijim i stabilnijim.